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通用菌落PCR檢測試劑盒

Cat. #：P8011，P8012

産品簡介

本試劑盒利用PCR原理，結合本公司的(de)快速DNA聚合酶（延伸速率20s/kb），設計适用性廣的(de)最佳引物，優化PCR反應緩沖體系，同時(shí)簡化檢測方法，可用于(yú)各種常用T載體克隆的(de)篩選檢測。

産品組成

活性定義

一(yī / yì ／yí)個(gè)活性單位（U）指用活性化的(de)大(dà)馬哈魚精子(zǐ)DNA作爲(wéi / wèi)模闆/引物，在(zài)72℃、30 min内，攝入10 nmol全核苷酸所需的(de)酶量。

保存條件

-20℃保存。

質量控制

純度檢測：經質量檢測，産品不(bù)含脫氧核糖核酸内切酶、脫氧核糖核酸外切酶和(hé / huò)核糖核酸酶污染。

功能檢測：PCR方法檢測本試劑盒無宿主殘餘DNA，也(yě)無其他(tā)DNA污染，能有效完成PCR擴增。

應用舉例

1. 準備樣品

将過夜培養的(de)平闆上(shàng)的(de)菌落編号後，用滅菌的(de)牙簽挑取單克隆菌體的(de)一(yī / yì ／yí)部分至反應體系中；或在(zài)1.5 ml EP管中分裝500 μl含有相應抗生素的(de)LB培養基，并做好标記，用無菌牙簽提取單個(gè)菌落至上(shàng)述培養基中，37振蕩（250-300rpm）培養4h，取1-2 μl菌液用于(yú)擴增。

2. 配制反應體系

請于(yú)冰上(shàng)配置反應體系，體系大(dà)小與組分用量與添加順序可調整：

*包含了(le／liǎo)上(shàng)下遊引物，擴增大(dà)小約爲(wéi / wèi)：克隆片段+250 bp。

● 加入各組分後，請用槍頭反複吸吹幾次，充分混勻。

● 在(zài)一(yī / yì ／yí)次配制多管需分裝時(shí)建議按（n+1）的(de)反應液量配制，以(yǐ)确保分配時(shí)的(de)耗損不(bù)會影響實驗，同時(shí)選擇大(dà)于(yú)總體積的(de)離心管便于(yú)混勻。

● 如需使用其他(tā)體積的(de)PCR反應體系，請按各組分比例縮減或增加各組分用量。

● 将混勻的(de)各管短暫離心，置于(yú)PCR儀中。

3. 設定反應程序進行PCR反應

● 設定PCR程序時(shí)，請根據目的(de)片段大(dà)小決定延伸時(shí)間，如果目的(de)片段大(dà)小爲(wéi / wèi)500 bp時(shí)，延伸時(shí)間爲(wéi / wèi)15 sec；500 bp-1 kb，延伸時(shí)間20 sec；目的(de)片段>1 kb時(shí)，延伸時(shí)間按20s/kb計算。

3. 分析結果

反應結束後取2-5 μl反應産物與loading buffer混勻後進行瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像設備觀察目的(de)條帶的(de)擴增情況。

注意事項

請嚴格按照說(shuō)明書提供的(de)實驗體系及實驗條件進行試驗。

室溫下DNA聚合酶有一(yī / yì ／yí)定的(de)活性，爲(wéi / wèi)避免發生非特異性擴增，請于(yú)冰上(shàng)配置反應體系，并且最後添加FS^TM Mix或模闆DNA。

挑取菌落時(shí)，應選擇單菌落，不(bù)要(yào / yāo)挑取太多菌體，以(yǐ)免影響PCR結果。

部分适用T載體參考下表：