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FS™ Mix Direct for Blood

Cat. #：P2071a，P2072a

産品簡介

FS™ Mix Direct for Blood是(shì)适合全血模闆擴增的(de)2×濃縮快速高效PCR預混合溶液，含有FS™ Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、緩沖液等PCR擴增必需組分（模闆與引物除外）。使用時(shí)，僅需在(zài)擴增體系中加入模闆和(hé / huò)引物即可進行PCR，從而(ér)可以(yǐ)極大(dà)地(dì / de)簡化操作過程，縮短操作時(shí)間，降低污染（加樣次數減少）。FS™ Mix Direct for Blood的(de)反應體系經過優化處理，高靈敏度的(de)FS™ Taq DNA聚合酶确保處理液中的(de)微量樣本得到(dào)高效擴增。本産品不(bù)用進行繁瑣的(de)DNA提取，最大(dà)限度減少實驗誤差和(hé / huò)交叉污染；同時(shí)依靠特殊的(de)緩沖體系增強PCR擴增的(de)特異性，保證擴增效果與DNA模闆擴增效果同樣可靠。

FS™ Taq DNA聚合酶是(shì)根據蛋白工程原理，以(yǐ)Taq DNA聚合酶爲(wéi / wèi)基礎，研發設計的(de)新一(yī / yì ／yí)代DNA聚合酶。本産品具有類似KOD酶的(de)快速擴增能力，延伸速度爲(wéi / wèi)20s/kb（70~75℃，簡單模闆可達5s/kb）。是(shì)普通Taq DNA聚合酶的(de)3倍，可縮短一(yī / yì ／yí)半以(yǐ)上(shàng)的(de)擴增時(shí)間；同時(shí)具備Taq DNA聚合酶擴增效率高、适應性廣等優點。FS™ Taq DNA聚合酶使用方法與普通Taq DNA聚合酶基本相同，隻需注意适當縮短延伸時(shí)間。該酶具有5'→3'聚合酶活性，無3'→5'外切酶活性。擴增産物具有3'-dA突出(chū)端，可直接用于(yú)TA克隆。

産品組成

本産品分體系中包含溴酚藍、不(bù)含溴酚藍兩類。體系中包含溴酚藍的(de)産品，PCR擴增産物可直接電泳檢測。這(zhè)兩類産品的(de)擴增性能無差異。如無特别說(shuō)明提供體系中包含溴酚藍的(de)包裝。

保存條件

-20℃保存2年。

質量控制

純度檢測：經質量檢測，産品不(bù)含脫氧核糖核酸内切酶、脫氧核糖核酸外切酶和(hé / huò)核糖核酸酶污染。

功能檢測：PCR方法檢測無宿主殘餘DNA，能有效擴增人(rén)基因組中的(de)單拷貝基因。

應用舉例

1. 配制反應體系

請于(yú)冰上(shàng)配置反應體系，體系大(dà)小與組分用量與添加順序可調整：

[1] 引物終濃度建議範圍：0.1-1 μM。特異性差時(shí)可降低濃度，效率低時(shí)可提高濃度。

[2] 可單獨訂購超純水（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。

[3] 可單獨訂購25mM MgCl₂（Cat. #：P9031）和(hé / huò)PCR Enhancer（Cat. #：P9041）。

2. 設定反應程序進行PCR反應

大(dà)多數模闆的(de)快速擴增條件：

[1] 退火溫度應根據Tm值較低的(de)引物來(lái)設。

[2] 延伸時(shí)間按20 sec/kb來(lái)設最佳。

1kb簡單模闆的(de)快速擴增條件：

由于(yú)1kb簡單模闆的(de)二級結構簡單，且長度較短，可同時(shí)縮短變性、退火時(shí)間至15s，以(yǐ)實現快速擴增。

3. 分析結果

反應産物可直接進行瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像設備觀察目的(de)條帶的(de)擴增情況。如有需要(yào / yāo)，可進行割膠回收。無産物或産物量少的(de)改進措施有：1調整退火溫度；2減少抑制劑的(de)影響，如提取的(de)基因組DNA中含有抑制擴增的(de)成分，需要(yào / yāo)高倍稀釋（1: 10000）後使用；3采用乙醇沉降洗脫，提高模闆DNA的(de)純度；4使用PCR添加劑，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl₂（Cat. #：P9031）等可提高産量。

操作注意事項

室溫下FS™ Taq DNA聚合酶有一(yī / yì ／yí)定的(de)活性，爲(wéi / wèi)避免發生非特異性擴增，請于(yú)冰上(shàng)配置反應體系，并且最後添加模闆DNA。

本産品可直接從新鮮或凍存的(de)全血、抗凝全血（EDTA或其他(tā)抗凝劑）、FTA卡等樣本擴增DNA。可用于(yú)人(rén)血或其他(tā)動物血液。

延伸時(shí)間視片段長度而(ér)定。一(yī / yì ／yí)般情況，≤500bp目的(de)片段延伸15s，500bp-1kb延伸20s，＞1kb延伸時(shí)間按20s/kb計算。

FS™ Taq DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉移酶活性，因此在(zài)PCR産物3’末端通常會加上(shàng)一(yī / yì ／yí)個(gè)多餘的(de)脫氧腺嘌呤核苷，可進行TA克隆。

FS™ Mix Direct for Blood也(yě)可采用常規程序擴增，擴增産物純化後可直接用于(yú)測序反應。

爲(wéi / wèi)方便加樣，全血可用PBS稀釋後加樣，模闆用量根據樣本、實驗要(yào / yāo)求而(ér)定。

引物設計注意事項

引物長度一(yī / yì ／yí)般在(zài)15-30個(gè)堿基之(zhī)間；上(shàng)下遊引物3’末端避免互補，避免出(chū)現3個(gè)以(yǐ)上(shàng)重複的(de)G或C，或出(chū)現發夾結構，否則會産生非特異性擴增；GC含量控制在(zài)40-60%，且上(shàng)下遊引物GC含量盡量接近；Tm值控制在(zài)55-65℃之(zhī)間，且上(shàng)下遊引物Tm值盡量接近，額外附加序列（酶切位點、修飾等）是(shì)非模闆匹配序列，不(bù)參與Tm值計算。

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