RT-PCR Mix for qPCR（預混型逆轉錄試劑盒）
貨号：R1031 規格：100次（20 µl反應體系）
産品說(shuō)明
RT-PCR Mix for qPCR是(shì)預混型逆轉錄反應試劑盒，操作簡便，可快速高效完成逆轉錄反應。其中Enzyme Mix含有高效逆轉錄酶和(hé / huò)熱敏型DNase，一(yī / yì ／yí)步完成基因組DNA的(de)清除以(yǐ)及RNA的(de)逆轉錄反應，RT Buffer包含逆轉錄反應所需的(de)其他(tā)組分，無需分步多次加樣，降低了(le／liǎo)樣品污染的(de)風險。同時(shí)，本試劑盒配備了(le／liǎo)Control Mix，用于(yú)陰性對照反應，檢驗RNA模闆中是(shì)否有基因組DNA殘留。本試劑盒的(de)逆轉錄産物對染料法和(hé / huò)探針法熒光定量PCR反應均有很好的(de)兼容性，可進行精準的(de)基因表達分析。
産品組分
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組分 |
R1031（100次） |
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Enzyme Mix |
100 μl |
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5X RT Buffer |
400 μl |
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Control Mix |
20 μl |
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RNase-free ddH2O |
1 ml × 2 |
保存條件
各組分均-20℃保存，并避免反複凍融。
适用範圍
第一(yī / yì ／yí)鏈cDNA 合成
注意事項
l 本品含有熱敏型DNase，請于(yú)冰上(shàng)使用本品各組分。
l 爲(wéi / wèi)保證成分均勻，請将Enzyme Mix、5X RT Buffer及Control Mix分别瞬時(shí)離心、吹打混勻後再吸取使用。
l 在(zài)操作過程中，注意防止引入RNase導緻RNA降解。RNA最好保存于(yú)-70℃，避免反複凍融。
l cDNA産物應置于(yú)-20℃或以(yǐ)下保存，避免反複凍融。
操作步驟
1. 配制反應體系
按以(yǐ)下體系，在(zài)冰浴的(de)無菌無酶離心管中配制反應混合液：
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組分 |
用量 |
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5X RT Buffer |
4 μl |
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Enzyme Mix |
1 μl |
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RNA |
1pg-1µg |
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RNase-free ddH2O |
補足至20 μl |
陰性對照反應（可選）
即不(bù)加逆轉錄酶的(de)反應，産物用于(yú)在(zài)qPCR中作爲(wéi / wèi)陰性對照，檢驗模闆RNA中是(shì)否有基因組DNA殘留
按以(yǐ)下體系，在(zài)冰浴的(de)無菌無酶離心管中配制反應混合液：
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組分 |
用量 |
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5X RT Buffer |
4 μl |
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Control Mix |
1 μl |
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RNA |
1pg-1µg |
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RNase-free ddH2O |
補足至20 μl |
2. 進行逆轉錄反應
将上(shàng)述混合液吹打混勻，瞬時(shí)離心收集至管底。按以(yǐ)下程序，在(zài)PCR儀中進行反應：
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溫度 |
時(shí)間 |
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50℃ |
15 min |
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85℃ |
5 sec |
3. qPCR反應及cDNA保存
cDNA産物可稀釋後立即進行染料法或探針法qPCR反應。若使用未稀釋的(de)cDNA原液，則體積不(bù)能超過反應體系的(de)1/10，以(yǐ)避免抑制反應效率。長期保存cDNA産物應于(yú)-20℃或以(yǐ)下環境中，并避免反複凍融。